细菌生理生化指标测定

细菌生理生化指标测定须知：

1、简介：

微生物生化反应是根据化学反应来检测微生物的代谢产物，生化反应一般用来鉴别一些在形态上和其他方面不易区别的微生物，因此微生物反应是微生物类别鉴定中的重要依据之一。

1）糖酵解试验

不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。

试验方法;以菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种干发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置36+1.0℃培养，每天观察结果，检视培养基颜色有改变(产酸)，小倒管中有气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管辟及管底有微小气泡，有时还可看出接种菌有动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。

本试验主要是检查细菌对各种糖，醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。

2）淀粉水解试验

某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇础不再变蓝色。

试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种干淀粉琼脂斜面或平板(一个平板可分区接种，试验数种培养物)或直接移种干淀粉肉汤中，于36+1℃培养24~48h，或于20℃培养5天，然后将础试剂直接滴浸干培养表面，若为液体培养物，则加数滴础试剂干试管中。立即检视结果，阳性反应(淀粉被分解)为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现色透明环，或肉汤颜色变化。阴性反应则透明环或肉汤呈深蓝色。

淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性，以pH7.2最话，淀粉琼脂平板不宜保存干冰箱，因而以临用时制备为妥。

3）V-P试验

某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V-P(+)反应。

试验方法:

A：OMeara出法·将试验菌接种干通里培养其:+36+1℃培养48h 培养液1m加O’Meara试剂(加有03%助酸Creatine或西西

Creatinine的40%氢氧化钠水溶液)1ml，摇动试管1~2min，静置千室温或36+1℃恒温箱，若4h内不呈现伊红，即判定为阴性。亦有主张在48~50°℃水浴放置2h后判定结果者。

B：Barritt氏法:将试验菌接种干通用培养基，干36+1℃培养4天，培养液2.5ml先加入a萘酚(2-na-phthol)纯酒精溶液0.6ml.再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml，摇动2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若红色出现，静置千室温或36+1℃恒温箱，如2h内仍不显现红色，可判定为阴性

C：快速法:将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5%a-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定结果，不产酸的培养物不能使用。

木试验一般用干肠杆菌科各菌属的鉴别，在用干芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生，故应省去或以氯化钠代替。

2、服务流程：

3、送样须知：

冻存菌株，需干冰寄送。

4、交付内容：

实验报告（包括仪器品牌，设备型号，试剂品牌货号等），原始数据。

5、试验周期：

具体试验周期请于工作人员联系。