发布时间：2026-01-29 05:11:32 - 更新时间：2026年01月29日 05:13
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志贺氏菌检测是公共卫生和食品安全控制的重要环节，该菌属是细菌性痢疾的主要病原体，传染性强，因此对其精准、高效的检测至关重要。
一、检测项目
一项全面的志贺氏菌检测通常包含以下核心项目，共同构成从初筛到确认的完整证据链：
增菌培养检测：原理是利用选择性液体培养基促进志贺氏菌生长，同时抑制杂菌。方法为将样品接种于GN肉汤或志贺氏菌增菌肉汤中，在一定温度下培养。其意义在于增加目标菌浓度，提高后续检出率，是样品处理的关键第一步。
分离培养与菌落形态学鉴定：原理是基于志贺氏菌在特定固体培养基上的生化特性形成特征性菌落。方法是将增菌液或样品划线接种于麦康凯、XLD或SS琼脂等选择性平板，观察菌落形态、颜色。意义在于从混合菌群中初步分离疑似志贺氏菌单菌落。
革兰氏染色镜检：原理是利用细菌细胞壁结构差异进行染色区分。方法是对可疑菌落进行涂片、染色，油镜下观察。志贺氏菌为革兰氏阴性短小杆菌。意义是快速确认细菌形态与染色特性，作为初步判定依据。
生化反应鉴定：
三糖铁试验：原理是检测细菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖的发酵能力及产硫化氢特性。志贺氏菌典型反应为斜面红色（碱）、底层黄色（酸）、不产气、不产硫化氢。
吲哚试验：检测色氨酸酶。不同志贺氏菌血清型结果各异，用于辅助鉴别。
尿素酶试验：志贺氏菌通常为阴性，可与变形杆菌等尿素酶阳性菌区分。
半固体动力试验：志贺氏菌无鞭毛，动力阴性。此试验是区分志贺氏菌与沙门氏菌等动力阳性菌的关键。
API 20E或类似生化鉴定系统：原理是使用系列微量生化反应管进行自动化判读，意义在于提供标准化的生化谱，准确鉴定到属或种水平。
血清学凝集试验：原理是利用特异性抗体与菌体抗原（O抗原）发生凝集反应。方法是用多价和单价志贺氏菌诊断血清与纯培养物进行玻片凝集。意义是确定菌株的血清群（如福氏、宋内氏、痢疾、鲍氏）和血清型，为流行病学溯源提供关键信息。
分子生物学检测：
PCR检测（如ipaH基因）：原理是扩增志贺氏菌高度保守的特异性毒力或管家基因片段。方法包括常规PCR、实时荧光定量PCR。意义在于提供高灵敏度、高特异性的快速检测，尤其适用于无法培养的样品或快速筛查。
多重PCR：可同时检测志贺氏菌属及区分主要血清型，提升检测效率。
基因测序（如16S rRNA、全基因组测序）：原理是分析基因序列同源性。意义是进行终极鉴定和分子分型，用于暴发调查和精准溯源。
毒力基因检测：原理是检测与侵袭力相关的基因（如ipaA, ipaB, ipaC, ipaD, virF等）。方法多为PCR技术。意义在于评估分离株的致病潜力。
抗菌药物敏感性试验：原理是测定细菌对抗菌药物的最小抑菌浓度。常用方法有琼脂稀释法、微量肉汤稀释法和纸片扩散法。意义是指导临床治疗，并监测耐药性流行趋势。
免疫学快速检测（如侧向层析试纸条）：原理是抗原-抗体结合及标记物显色。意义在于提供现场快速初筛结果，但通常作为辅助手段，需用标准方法验证。
环境耐受性检测：原理是模拟特定环境条件（如pH、温度、湿度）评估菌株存活能力。意义在于评估其在食品加工或环境中的风险持久性。
二、检测范围
志贺氏菌检测广泛应用于可能污染并导致疾病传播的多个领域：
食品及其原料：重点关注生鲜蔬菜、水果、沙拉、即食食品、乳制品、肉类及其制品。
食品生产环境：包括加工设备表面、工作台面、传送带、刀具等。
食品接触材料：如餐具、包装材料、容器、加工助剂等。
生活饮用水及包装饮用水。
医疗与卫生领域：如病人粪便标本、医疗机构环境表面、消毒效果评价。
医疗器械：尤其是与人体黏膜或消化道接触的器械。
儿童玩具：特别是婴幼儿可能放入口中的玩具，需严格检测微生物指标。
公共场所：公园、游乐场、公共交通工具的接触表面。
水源与土壤：追踪污染源，特别是与粪便污染相关的水体和农田土壤。
从业人员健康检查：食品、餐饮、保育等行业从业人员的带菌筛查。
三、检测标准
检测活动需遵循国际、国家或行业标准以确保结果的一致性与权威性。
中国国家标准（GB）：
GB 4789.5-2012 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验》：中国食品检测的核心标准，规定了传统的培养、生化及血清学鉴定流程。
GB/T 7912.1-2023 《消毒器械灭菌效果检验方法 第1部分：微生物学检验方法》等涉及消毒效果的标准中可能包含相关指示菌检测。
国际标准化组织标准（ISO）：
ISO 21567:2004 《食物链微生物学 志贺氏菌检测的水平方法》：国际通行的参考方法，技术路线与GB 4789.5类似但细节存在差异。
美国材料与试验协会标准（ASTM）：
ASTM F3511-21 《通过激光诱导击穿光谱法（LIBS）快速筛查环境表面志贺氏菌的标准指南》：代表一种新型快速筛查技术的标准。
ASTM E2197 《表面消毒剂杀菌活性的定量盘载法》可用于评估消毒剂对志贺氏菌的杀灭效果。
药品与医疗器械领域：中国药典、美国药典（USP）及医疗器械相关生物学评价标准（如ISO 10993系列）虽不专门针对志贺氏菌，但规定了无菌或微生物限度检查，是相关产品安全评价的依据。
四、检测仪器
现代微生物实验室依赖于一系列精密仪器以完成高效、准确的检测：
全自动微生物鉴定及药敏分析系统：集比浊、接种、培养、生化反应检测和药敏分析于一体，可快速（通常4-24小时）获得志贺氏菌的鉴定结果和MIC药敏数据，通量高，标准化程度高。
实时荧光定量PCR仪：用于志贺氏菌特异性基因的快速、定量检测。具有高灵敏度、高特异性、闭管操作防污染、速度快（1-3小时）的特点，是分子检测的核心设备。
普通PCR仪：用于常规的靶基因扩增，为凝胶电泳或测序提供模板，成本相对较低。
脉冲场凝胶电泳系统：通过对细菌全基因组DNA进行限制性酶切和大片段分离，生成特异性指纹图谱。是志贺氏菌分子分型和食源性疾病暴发溯源调查的“金标准”工具之一。
全自动酶联免疫分析仪：可自动化完成基于ELISA原理的抗原或抗体检测，适用于高通量样本筛查。
全自动细菌培养监测系统：连续监测血培养瓶或其他培养容器中微生物代谢产生的气体等信号，实现早期、快速的阳性报警，适用于临床标本中志贺氏菌的快速初筛。
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪：通过分析细菌核糖体蛋白的质谱指纹图谱，可在数分钟内完成对单个菌落到属、种水平的快速鉴定，极大缩短了传统生化鉴定的时间。
超净工作台/生物安全柜：提供无菌操作环境（超净台）或人员、样品与环境均得到保护的操作空间（生物安全柜），是进行所有微生物样品前处理、接种等操作的基础保障设备。
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