生物大分子药物早期发现

　　(1)抗体药物早期发现

　　鼠源抗体

　　嵌合抗体

　　人源化抗体 (CDR移植，定点突变)

　　双特性抗体(e.g. CD3, PDL-1)

　　抗体片段(e.g. ScFv, Fab)

　　(2)表达纯化

　　重组蛋白表达 Ecoli, CHO

　　蛋白偶联标记：生物素、酶或荧光偶联

　　杂交瘤抗体少量制备：体外(转瓶)或体内(腹水)

　　抗体纯化：抗原亲和吸附、离子交换、Protein A/G/L

　　抗体生产：瞬时转染 HEK293, CHO，稳转细胞株构建

　　(3)单抗，多抗，及双抗

　　基因密码子修饰，表达纯化

　　多动物种属：SPF级小鼠、兔、豚鼠

　　AAALAC 动物设施

　　弗氏佐剂免疫，快速免疫

　　细胞融合及亚克隆筛选

　　杂交瘤抗体可变区测序分析

　　双抗构建 iPhaseCross平台技术

　　(4)鉴定及鉴别

　　含量分析(UV-Vis A280， BCA)

　　纯度：SDS-PAGE， HPLC

　　抗体亚型鉴定

　　种属特异性

　　结合活性/亲和力: EC50, KD, Kd, Ka (ELISA，BlitZ)

　　双特异性抗体结合活性

　　中和活性：IC50

　　(5)抗药性抗体ADA

　　免疫方法开发

　　筛选试验

　　确证试验

　　滴度试验

　　中和试验

　　试剂盒定制生产

　　(6)生物活性及功能

　　ADCC和 CDC试验

　　细胞迁移, 细胞增殖, 细胞毒性试验

　　细胞因子激活试验

　　信号转导，蛋白磷酸化试验

　　报告基因检测

　　双特异性抗体的结合试验

　　靶点选择性

　　体内PD和PK研究：大鼠，小鼠，犬，猴

北检院检测优势

　　检测周期短

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