发布时间：2026-01-28 22:50:47 - 更新时间：2026年01月28日 22:52
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宋内志贺菌检测技术综述
宋内志贺菌作为志贺氏菌属中引发细菌性痢疾的主要病原菌之一，其传播途径主要为粪-口传播，在食品、环境及特定工业产品中存在构成显著的公共卫生风险。因此，建立全面、精准、高效的检测体系对于预防疾病爆发、保障产品质量与公共安全至关重要。
一个完整的宋内志贺菌检测流程包含多个层面，从初步筛查到精确鉴定与分型，具体项目如下：
样品前处理与增菌：
原理：利用非选择性或选择性增菌液，在适宜温度下孵育，使样品中可能存在的受损或低浓度的目标菌得以复苏并大量繁殖，同时抑制部分竞争性杂菌。
方法：无菌操作下将样品接种于志贺氏菌增菌肉汤（如GN肉汤）中，均质后于35-37℃培养18-24小时。
意义：提高检测灵敏度，是后续所有检测步骤的基础。
选择性分离培养：
原理：利用选择性琼脂培养基中的抑菌成分（如胆盐、染料、抗生素）和鉴别成分（如糖苷、pH指示剂），抑制非目标菌生长，并依据宋内志贺菌的生化特性（通常不发酵乳糖、木糖）形成特征性菌落。
方法：将增菌液划线接种于木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂、麦康凯琼脂、沙门氏菌-志贺氏菌琼脂等平板上，35-37℃培养18-48小时，观察典型菌落（无色透明、中等大小）。
意义：初步分离与视觉筛查，获取纯培养物。
革兰氏染色镜检：
原理：基于细菌细胞壁结构的差异，通过结晶紫、碘液、酒精和番红染液的顺序处理，将细菌区分为革兰氏阴性（红色）和阳性（紫色）。
方法：挑取可疑菌落涂片，进行标准革兰氏染色，油镜观察。
意义：快速验证细菌形态（宋内志贺菌为革兰氏阴性短杆菌）和纯度，提供初步分类信息。
关键生化反应鉴定：
原理：检测细菌代谢特定底物（如糖类、氨基酸、酶类）的能力，产生颜色、气体等可见变化。
方法：使用三糖铁琼脂（TSI，斜面产碱/底层产酸不产气，H₂S阴性）、尿素酶试验（阴性）、吲哚试验（阴性）、动力试验（无动力）等进行系统测试。
意义：传统鉴定的核心，通过生化谱与标准模式比对进行种属推定。
血清学凝集试验：
原理：利用宋内志贺菌特有的O抗原（I相和II相）与相应特异性抗血清发生抗原-抗体反应，形成肉眼可见的凝集颗粒。
方法：取纯培养物与志贺氏菌多价及宋内志贺菌单价诊断血清在玻片上进行凝集试验。
意义：是确认宋内志贺菌的关键步骤，提供血清型信息。宋内志贺菌仅有单一血清型，但存在I相（光滑型）和II相（粗糙型）的变异。
自动化微生物鉴定系统：
原理：基于细菌的生化、酶学或碳源利用谱，与系统内置的大型数据库进行比对分析。
方法：将纯菌悬液接种至专用鉴定板条（如API 20E, VITEK GN卡，Biolog GEN III板），仪器自动孵育、读取结果并给出鉴定报告。
意义：实现快速、标准化、高通量的细菌鉴定，大大提高实验室效率。
聚合酶链式反应检测：
原理：针对宋内志贺菌高度保守的特异性基因序列（如ipaH基因、侵袭性质粒抗原H基因，或针对O抗原合成基因簇的靶点），设计引物进行体外核酸扩增，通过电泳或荧光探针检测扩增产物。
方法：从样品或增菌液中提取DNA，进行常规PCR或实时荧光定量PCR。
意义：检测速度快、特异性高，尤其适用于成分复杂样品中低含量病原体的快速筛查，可绕过培养步骤。
环介导等温扩增技术：
原理：针对靶基因的多个区域设计特异性引物，在恒定温度（约60-65℃）下进行高效、特异的核酸扩增，通过副产物焦磷酸镁沉淀或荧光染料判断结果。
方法：使用专用LAMP试剂盒，水浴锅或恒温金属浴即可完成扩增。
意义：设备要求简单、反应快速、灵敏度高，适用于现场或资源有限实验室的快速检测。
基因测序与分子分型：
原理：对细菌的特定管家基因或全基因组进行测序，通过序列比对分析进行精确鉴定和溯源。
方法：进行16S rRNA基因测序、多位点序列分型或全基因组测序。
意义：鉴定的“金标准”，可解决疑难菌株鉴定问题，并用于分子流行病学调查和溯源分析。
免疫磁珠分离技术：
原理：将针对宋内志贺菌表面抗原的特异性抗体偶联到磁性微球上，通过抗原-抗体结合，在外加磁场作用下选择性富集目标菌。
方法：将样品或增菌液与免疫磁珠孵育，磁分离后洗涤，将捕获的细菌用于后续培养或核酸检测。
意义：显著提高复杂基质中目标菌的分离效率，缩短检测时间，提升灵敏度。
酶联免疫吸附测定：
原理：将特异性抗体包被于微孔板，捕获样品中的宋内志贺菌抗原，再通过酶标二抗与底物反应产生颜色信号进行定性或半定量检测。
方法：使用商业化的ELISA试剂盒进行操作。
意义：适合大批量样品的初筛，但通常用于检测细菌抗原，对死菌也有反应，需结合培养法确认。
质谱鉴定：
原理：通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱获取细菌的蛋白质指纹图谱（主要为核糖体蛋白），与数据库中的参考谱图进行比对。
方法：挑取单菌落直接点靶，上机检测，数分钟内得出结果。
意义：实现菌株水平的快速、准确鉴定，已成为临床和高端检测实验室的主流鉴定技术之一。
宋内志贺菌检测技术广泛应用于以下关键领域，以评估其污染风险：
食品：生鲜果蔬、即食食品、乳制品、肉类及水产品，尤其是沙拉、凉拌菜等高风险食品。
饮用水及包装饮用水：市政供水、瓶装水、桶装水的微生物安全评估。
食品接触材料：餐具、厨具、食品包装容器及材料的微生物负载测试。
儿童玩具：尤其是入口玩具及婴幼儿玩具的卫生安全检测。
医疗器械：对一次性使用卫生用品、部分低危器械的微生物限度检查。
环境样本：医院、学校、食品加工厂等公共场所的物体表面、污水、土壤样本。
临床诊断：腹泻患者的粪便、肛拭子等样本的病原学诊断。
化妆品及个人护理品：原料及终产品，特别是含水成分产品的微生物控制。
药品生产环境：对非无菌制剂生产车间、原料的污染菌监控（作为指示菌之一）。
疫情溯源与公共卫生监测：在疾病爆发时，对可疑传播载体和环境进行检测，追踪传染源。
检测活动严格遵循国内外权威标准，确保结果的可靠性、可比性和法律效力。
GB 4789.5-2012 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验》：中国食品安全检测的强制性标准，规定了食品中志贺氏菌（包括宋内志贺菌）的经典培养检验方法。
ISO 21567:2004 《食物链微生物学—志贺氏菌检测的水平方法》：国际标准化组织制定的检测标准，为全球贸易和科研提供一致的方法学基础。
FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) Chapter 6: Shigella：美国食品药品管理局的官方分析方法，包含传统及分子生物学方法。
ASTM F3510-21 《使用PCR方法检测环境表面中志贺氏菌的标准指南》：美国材料与试验协会标准，指导使用分子方法对环境样本进行检测。
药典标准：如《中国药典》非无菌产品微生物限度检查中，规定不得检出志贺氏菌。
行业与产品标准：各类食品、饮用水、玩具、化妆品等产品标准中，均将志贺氏菌（通常包括宋内志贺菌）列为重要的致病菌检测项目或不得检出的病原体。
现代化的宋内志贺菌检测依赖于一系列精密仪器。
生物安全柜：提供二级生物安全防护，是所有活菌操作的基础设备，保障人员与环境安全。
恒温培养箱：用于样品增菌和分离平板培养，要求温度均匀、控制精确（±0.5℃）。
全自动微生物生化鉴定仪：如基于比色法的鉴定系统，可自动判读生化反应结果并生成报告，实现高通量鉴定。
实时荧光定量PCR仪：实现核酸的快速扩增与实时检测，具备高灵敏度、高特异性和定量能力，配备不同荧光通道以支持多重检测。
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪：通过分析细菌的蛋白质组指纹进行快速（数分钟）菌种鉴定，通量高，数据库庞大。
脉冲场凝胶电泳系统：用于细菌分子分型与溯源，通过限制性内切酶处理基因组DNA，产生特征性指纹图谱，是传统流行病学调查的金标准工具之一。
全自动酶联免疫分析仪：自动完成ELISA检测的加样、孵育、洗涤、读数等步骤，提高检测效率和结果一致性。
微生物快速检测系统：基于比浊法、阻抗法、荧光标记法等原理，可对增菌过程进行实时监控，缩短阴性结果报告时间。
核酸提取仪：从复杂样品基质中自动化纯化高质量核酸，确保下游分子检测的稳定性与效率。
显微成像系统：集成光学显微镜与数字相机，用于菌落、染色标本的观察、拍摄和测量，便于记录与远程分析。
免疫磁珠分离器：提供可控的磁场，用于免疫磁珠分离技术中目标菌的捕获与富集。
环介导等温扩增检测仪：专为LAMP技术设计，通常集成恒温与荧光检测功能，便于现场快速检测。
综上所述，宋内志贺菌的检测已形成一个多技术融合、多层次验证的完整体系。从传统的培养生化到现代分子生物学和质谱技术，检测方法不断向更快速、更灵敏、更智能的方向发展。实验室需根据检测目的、样品类型、通量要求和资源条件，合理选择和组合不同的检测项目与仪器，并严格遵循相关标准，才能确保检测结果的科学准确，为风险预警和决策提供坚实的技术支撑。
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